ELISA试剂盒的用途
ELISA的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或仍保持其活性,四环素ELISA试剂盒,酶标记的抗原或既保留其活性,又保留酶的活性。
在测定时,受检标本(测定其中的或抗原)与固相载体表面的抗原或起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗原或,也通过反应而结合在固相载体上。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高,间接地放大了反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定。
然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的才能充分发挥其方法学的优点。
ELISA试剂盒的测试要求
做好对照
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。
有时本底较高,说明有非特异性反应。
实验条件的选择
在ELISA中,四环素ELISA试剂盒价格,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,四环素ELISA试剂盒报价,如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。
其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。
常用的是40孔聚乙烯凹孔板。
不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,四环素ELISA试剂盒供应商,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被(或抗原)的选择:将(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。
吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。
蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。
选择OD值大而蛋白量少的浓度。
对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3)酶标记工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记部份)。
然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。
有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。
有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。
底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。
通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。
底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
ELISA试剂盒——ELISA实验通用规则
1、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
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